Sentrifugasi Gradien CsCl


Bila larutan pekat CsCl disentrifugasi dengan kecepatan tinggi untuk beberapa jam, gaya sentrifugal akan mendorong CsCl untuk mengendap ke dasar tabung, suatu proses yang akan dilawan dengan difusi kembali CsCl ke arah puncak tabung. Akhirnya pada keadaan seimbang, proses yang melawan ini akan menjadi berimbang, dan gradien konsentrasi CsCl yang stabil akan tercapai yang didalamnya akan diperoleh peningkatan CsCl secara progresif dari puncak ke dasar tabung. Sebaliknya, kepadatan larutan pada masing-masing posisi pada gradien adalah sebanding dengan konsentrasi CsCl-nya.

 

Bila potongan-potongan DNA dicampurkan dengan CsCl dan keduanya disentrifugasi sampai keadaan seimbang, masing-masing potongan akan cenderung untuk berpindah dan menjadi terkumpul pada daerah gradien yang kepadatannya larutannya cocok dengan kepadatan mengambang DNA. Jadi, bila semua potongan dalam suatu cuplikan mempunyai kepadatan mengambang bersih yang sama, satu gelang tunggal DNA akan membentuk gradien, sedangkan bila potongan-potongan itu berbeda menyolok dalam kepadatannya, akan terbentuk dua gelang atau lebih. Untuk memperlihatkan posisi dan lebarnya berbagau gelang, diambil kesempatan dengan adanya kenyataan bahwa asam nukleat menyerap cahaya ultraiolet pada 260 nm dan dapat dideteksi dengan alat-alat optik. Kemudian nilai-nilai kepadatan mengembang tiap-tiap kelas fragmen dapat dihitung.

Advertisements

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s